HE染色。

                                                                    檢碩科學(xué)上海有限公司
染色結(jié)果觀察蘇木精—伊紅染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ，簡(jiǎn)稱HE染色法，石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一。蘇木精染液為堿性，主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著紫藍(lán)色；伊紅為酸性染料，主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分著紅色。

細(xì)胞核被蘇木精染成鮮明的藍(lán)色，軟骨基質(zhì)、鈣鹽顆粒呈深藍(lán)色，粘液呈灰藍(lán)色。細(xì)胞漿被伊紅染成深淺不同的粉紅色至桃紅色，胞漿內(nèi)嗜酸性顆粒呈反光強(qiáng)的鮮紅色。膠原纖維呈淡粉紅色，彈力纖維呈亮粉紅色，紅血球呈橘紅色，蛋白性液體呈粉紅色。著色情況與組織或細(xì)胞的種類有關(guān)，也隨其生活周期及病理變化而改變。例如，細(xì)胞在新生時(shí)期胞漿對(duì)伊紅著色較淡或輕度嗜堿，當(dāng)其衰老時(shí)或發(fā)生退行性變則呈現(xiàn)嗜伊紅濃染。膠原纖維在老化和出現(xiàn)透明變性時(shí)，伊紅著色由淺變深。

細(xì)胞核裂解、溶解、細(xì)胞腫脹、細(xì)胞膜不完整的特征。神經(jīng)元細(xì)胞周圍有空白區(qū)域，提示有水腫的存在。

小鼠飼喂了高脂肪食品，在血管周圍可見(jiàn)脂肪空洞。水泡樣變性和脂肪變性 炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。

在HE染色條件下，脂類均會(huì)被染色過(guò)程中使用到的二甲苯等有機(jī)溶劑溶解而成空泡或空斑樣，一般情況下，空泡樣脂滴輪廓清晰，易于分辨。但是為了證明確實(shí)是脂類，還需用針對(duì)脂類的特殊染料及染色方法，如油紅，蘇丹黑等。

脂肪變性在石蠟切片HE染色下的有兩個(gè)特點(diǎn)：1.細(xì)胞核被脂滴擠向一側(cè)，2.由于脂肪被溶解，空泡很干凈，邊緣整齊。

空泡變性：核在中央，空泡內(nèi)有網(wǎng)狀物質(zhì)邊緣不整齊。

染色步驟

1、取材與固定：

從人或動(dòng)物新鮮尸體上取下組織塊(一般厚度不超過(guò)0．5厘米)投入預(yù)先配好的固定液中(10％福爾馬林，Bouin氏固定液等)使組織、細(xì)胞的蛋白質(zhì)變性凝固，以防止細(xì)胞死后的自溶或細(xì)菌的分解，從而保持細(xì)胞本來(lái)的形態(tài)結(jié)構(gòu)。

2、脫水透明：

一般用由低濃度到高濃度酒精作脫水劑，逐漸脫去組織塊中的水份。再將組織塊置于既溶于酒精，又溶于石蠟的透明劑二甲苯中透明，以二甲苯替換出組織塊的中酒精，才能浸蠟包埋。

3、浸蠟包埋：

將已透明的組織塊置于已溶化的石蠟中，放入溶蠟箱保溫。待石蠟*浸入組織塊后進(jìn)行包埋：先制備好容器(如折疊一小紙盒)，倒入已溶化的石蠟，迅速夾取已浸透石蠟的組織塊放入其中。冷卻凝固成塊即成。包埋好的組織塊變硬，才能在切片機(jī)上切成很薄的切片。

4、切片與貼片：

將包埋好的蠟塊固定于切片機(jī)上，切成薄片，一般為5—8微米厚。切下的薄片往往皺折，要放到加熱的水中燙平，再貼到載玻片上，放45℃恒溫箱中烘干。

5、脫蠟染色：

常用HE染色，以增加組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)各部分的色彩差異，利于觀察。蘇木精(Hematoxylin，H)是一種堿性染料，可將細(xì)胞核和細(xì)胞內(nèi)核糖體染成藍(lán)紫色，被堿性染料染色的結(jié)構(gòu)具有嗜堿性。伊紅(Eosin，E)是一種酸性染料，能將細(xì)胞質(zhì)染成紅色或淡紅色，被酸性染料染色的結(jié)構(gòu)具有嗜酸性。染色前，須用二甲苯脫去切片中的石蠟，再經(jīng)由高濃度到低濃度酒精，最

后入蒸餾水，就可染色。HE染色過(guò)程是：

①將已入蒸餾水后的切片放入蘇木精水溶液中染色數(shù)分鐘。 ②酸水及氨水中分色，各數(shù)秒鐘。③流水沖洗1小時(shí)后入蒸餾水片刻。

④入70％和90％酒精中脫水各10分鐘。⑤入酒精伊紅染色液染色2—3分鐘。

6、脫水透明：

染色后的切片經(jīng)純酒精脫水，再經(jīng)二甲苯使切片透明。

7、封固：

將已透明的切片滴上加拿大樹(shù)膠，蓋上蓋玻片封固。待樹(shù)膠略干后，貼上標(biāo)箋，切片標(biāo)本就可使用

                                                                                                                                  本篇轉(zhuǎn)至實(shí)驗(yàn)之家